凯氏定氮仪与其他测定方法的比较

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蛋白质是由不同的Α-氨基酸按一定的顺序通过酰胺键(蛋白质化学中专称肽键)缩合而成的,具有较稳定的构象并具有一定生物功能的生物大分子。其生物功能主要表现在:生命活动所需要的许多小分子物质和离子,是由蛋白质来运输的;生物的运动离不开蛋白质;生物体的防御系统,用以防御致病微生物或病毒侵害而产生的抗体,也是一类高度专一的蛋白质,起到保护机体的作用，蛋白质含量的测定可以使用凯氏定氮仪进行快速的测定分析。
劳里改良法(BCA法):又称二喹啉甲酸(BCA)检测法。这是近年来研制的一种改进Low ry法,反应简单而且几乎没有干扰物质的影响。这种方法的原理[1]是在碱性环境下蛋白质分子中的肽键结构能与Cu2+络合生成络合物,同时将Cu2+还原成Cu+。而BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合,形成稳定的有颜色的复合物,在562nm处有高的吸收值。颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,可根据吸收值的大小来计算蛋白质的含量。此法的优点是试剂单一,终产物稳定,与Low ry法相比几乎没有干扰物质的影响。但是该方法的反应时间长,蛋白质也会发生不可逆的变性，而定氮仪则是一种比较经典的测定方法，该方法在我国广泛的推广运用。Krystal发展了银染色法测定微量蛋白质的方法,蛋白质样品先用甘油醛处理,之后与银氨溶液混合, 10分钟后,加入硫代硫酸钠终止反应,测定420nm的吸光度。该法的先行范围为15- 2000ng,比Bradford法灵敏10倍。蛋白质银复合物形成快,显色稳定,碳水化合物,非离子表面活性剂几乎不干扰测定。BORA TYN SKY加入双硫腙,A gCL与双硫腙形成的不溶络合物因蛋白质的存在而稳定,在555nm测定吸光度。胶体金属,如金、银、钯也与蛋白质作用,已被用于测定微量蛋白质。胶体金的测定波长为590nm,可以测定20ng的蛋白质;胶体钯可测定100ng的牛血清蛋白,而强碱高浓度的盐以及SDS有干扰,并且不同的蛋白质的信号有差别。
凯氏定氮仪：http://www.dsddy.cn/